EMAガイドラインの解説：リードアクロス法によるニトロソウレアの許容摂取量を理解する

医薬品のレギュレーションは常に進化しており、医薬品の安全性と有効性を確保するには、最新のガイドラインを常に把握しておくことが必須です。欧州医薬品庁（EMA）は最近、ガイドラインを改訂し、発がん性があることが知られているN-ニトロソ化合物の一種であるニトロソウレアの許容限度値（AI）を規定しました。

先日開催したウェビナーにおいて、専門家のNatan Segretti氏（Consult Lhasa社、CSO ）とDavid Ponting氏（Lhasa Ltd社、主席科学者）がこれらの改訂内容を検討し、リードアクロスを用いた許容限度値設定手法について議論しました。ここでは、ウェビナーで得られた主要な知見を要約し、これらのガイドライン変更がもたらす予想される影響について考察します。

ニトロソウレアとそのリスクを理解する
ニトロソウレアは、 N-ニトロソ化合物という広義のカテゴリーに属し、反応性の高いジアゾニウムイオンを形成する可能性があることから、医薬品不純物に関する議論の焦点となっています。これらのイオンはDNAをアルキル化し、変異を引き起こす可能性があります。ニトロソアミンとは異なり、ニトロソウレアは遺伝毒性作用を発揮するために代謝活性化を必要としないため、リスク評価において重要な懸念事項となる可能性があります。
Natan氏は、こうしたリスク評価の課題について次のようにコメントしています。

「安全基準の観点からリスクとなり得る分子は数多く存在します。ニトロソウレアとニトロソグアニジンがなぜリスクとなり得るのか、そしてより強い懸念を持って検討すべき理由を理解することは非常に重要です。」

ニトロソウレアとcohort of concern
ニトロソウレアがcohort of concernに含まれる理由を理解するには、そのメカニズム経路と遺伝毒性作用を発揮するメカニズムを調べることが不可欠です。 ニトロソウレア類およびグアニジン、アミドなどの類似の官能基を持つ化合物は、生理条件下で自発的にジアゾニウムイオンを形成します。この形成には代謝活性化が必要ないため、発がん性にα-ヒドロキシ化を利用するニトロソアミン類とは異なります。しかし、これは標準的なAmes試験がそれらの変異原性を予測するものであり、S9が存在しない場合でも変異原性を示すことが予想されます。 David氏は、cohort of concernに含める基準と、さまざまな化合物の効力を評価する際の微妙な違いについて、次のように見解を述べています。

「ここで少し挑戦的な発言をしますが、コホートをもう少し絞り込むことができるはずです。現在、コホートはすべてN-ニトロソ化合物ですが、当時、コホートにふさわしい効力を持つのは約半分しかないことが指摘されていました。代謝活性化のためのα水素を持ち、ニトロソアミン、またはニトロソ化されたアミド、尿素などであれば、ジアゾニウムイオンを得ることができます。この非常に強力な反応のリスクがあるため、コホートに含めるべきです。
一方、ニトロソ化された芳香族化合物、または炭素に二重結合していないN-ニトロソ化合物は、ジアゾニウムイオンを形成するのが困難または不可能であるため、コホートに含めるべきではありません。α水素を持たないN-ニトロソアミンも同様にジアゾニウムイオンを生成する経路がないため、コホートに含めるべきではありません。」
 
ニトロソ尿素の許容摂取量に関するEMAガイドライン
EMAの改訂ガイドラインでは、特定のニトロソウレア類について、その発がん性を反映した具体的な許容限度値が定められています。例えば、いくつかの主要なグアニジン型ニトロソウレア類の許容限度値は553ナノグラム/日と設定されています。これらのリミットは、発がん性分類アプローチ（CPCA）とリードアクロス法を用いたロバストな毒性データに基づいて算出されています。これらのリミットは、患者様が重大な健康リスクをもたらす可能性のあるレベルのニトロソウレア類に曝露されないよう、保守的な設定となっています。

一方、一部の芳香族 N-ニトロソ化合物は、前述のようにcohort of concernにはならないはずですが、変異原性不純物の一般的な TTC である 1,500 ng/日で安全であると考えられています。ただし、これらの化合物は芳香族アミンと類似する経路で変異原性を示すため、潜在的に変異原性不純物である可能性があります。

前述の通りcohort of concernから除外されるべき芳香族N-ニトロソ化合物の中には、変異原性不純物に対する一般的な毒性懸念閾値（TTC）である、1,500 ng/日で安全とみなされるものもあります。cohort of concernに属さないにもかかわらず、これらの化合物は芳香族アミンと同様のメカニズムにより、依然として変異原性を有しています。
 
ニトロソウレアのリードアクロス評価
リードアクロスは毒性リスク評価で広く使用されている方法であり、構造的および毒性学的類似性に基づいて、ある物質から別の物質へのデータの外挿を可能にします。

ウェビナーでは、David氏が化合物のケーススタディを通して、当社のin silicoツールAcrosticの実用的応用例を示し、ニトロソウレアのAI値を決定するためのツールとしてAcrosticがどのように役立つかを示しました。Acrosticは、毒性学者が関連するアナログを特定し、それらの構造類似性、毒性データ、および薬物動態特性を評価して、対象化合物の許容限度値を設定するのに役立ちます。

Acrosticが提供する体系的なリードアクロスアプローチにより、確立されたニトロソウレア許容限度値が証拠に基づいており、規制上の期待と一致していることが保証されます。
 
結論
EMAの改訂ガイドラインとリードアクロス法の活用は、ニトロソウレアのリスク評価における大きな進歩を表しています。Acrosticのようなツールを活用することで、製薬企業は自社製品が安全基準を満たしていることを保証し、潜在的な発がんリスクから患者様を守ることができます。このウェビナーでは、これらのガイドラインを実施するための規制枠組みと、実践的な戦略に関する貴重な知見を提供しました。
AcrosticまたはLhasaのin silicoツールについてご質問がある場合、またウェビナーの録画を視聴ご希望の方は、下記までお問い合わせください。

担当：増子　聡
Email: satoshi.mashiko@lhsalimited.org
TEL: 080-9804-1171

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